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本试剂盒首先用红细胞裂解液Buffer MTBP处理抗凝血液，通过离心获得白细胞沉淀，采用Buffer MCL裂解白细胞释放出基因组DNA，在结合液的作用下MagicMag Beads选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去MagicMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下MagicMag Beads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。从300μL抗凝血液中可以获得3～8μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

• 自备材料：磁力架、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、水浴锅、1.5mL离心管、70%乙醇和RNase A溶液（10mg/mL）。
  
• 每次使用前请检查Buffer MCL是否有沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解沉淀后使用。

• 样品处理
  
  • 含无核红细胞的抗凝血液（如人血液）：取300μL抗凝血液加入600μL Buffer MTBP，充分混匀，室温放置1min至红细胞完全裂解，此时液体为透明红色。
    
  • 含有核红细胞的抗凝血液（如家禽血），取10～20μL抗凝血液，直接进行步骤3。
    
    • 冻存血液应在室温或者37℃缓慢解冻，不可以高温加热，以免血凝块的形成。
• 10000rpm离心2min，弃上清。向离心管中加入200μL TE Buffer重悬沉淀，10000rpm离心2min，弃上清。
• 向离心管中加入400μL Buffer MCL和20μL Proteinase K溶液，震荡重悬白细胞沉淀，65℃水浴20min。
  
  • 如需得到无RNA的DNA，请在水浴之后向离心管中加入20μL RNase A，混匀之后室温放置5min。
• 向离心管中加入400μL Buffer MA和10μL MagicMag Beads，吸打或者点振混匀，室温静置1min。
  
  • 向离心管中加MagicMag Beads之前，请将其充分混匀。
    
  • 请务必将MagicMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留的MagicMag Beads吸打干净。
    
  • 处理多个样品时，可先将Buffer MA与MagicMag Beads按40:1的体积比混匀，然后向每个离心管中加入410μL，上述混合液加入过程中请间或混匀，确保磁珠呈悬浮状态。
    
  • 吸打或者点振混匀之后，可能会出现絮状物质，属于正常现象。
• 将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 向离心管中加入400μL Buffer MBW，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 向离心管中加入700μL 70%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤7一次，室温开盖干燥15～20min或者55℃恒温箱中开盖干燥5～7min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
• 向离心管中加入50～100μL TE Buffer (pH8.0)，65℃水浴5～10min，间或混匀。
  
  • 请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水（pH>7.5）代替。
• 取出离心管并置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得纯的基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保MagicMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagicMag Beads，否则影响基因组DNA的纯度。

• 得率低
  
  • 取样前样品没有充分混匀。取样前请将样品充分混匀，使白细胞充分混匀。
    
  • 样品中白细胞含量过低。第2步完成之后应该看到白细胞沉淀，如果无白细胞沉淀，可以向离心管中再次加入抗凝血液和Buffer MTBP重复步骤1和2。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MA和MagicMag Beads之后，请将其充分混匀，并使MagicMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失MagicMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagicMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MagicMag Beads也吸附在管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下MagicMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下MagicMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，磁珠释放出大量的基因组DNA。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 血样不新鲜。请尽量选择新鲜的血样。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间请不要超过30min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜血样。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的血样应分装后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。若出现残液有不同程度的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管管底的液体。
    
  • MagicMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使MagicMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • MagicMag Beads没有完全干燥。请将MagicMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads，请将上清液放回原管，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。